cck8檢測(cè)試劑盒為MTT 法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)。

　　使用說(shuō)明：

　　一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí) （測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí)）

　　1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

　　2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做 3-5 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組 3-6 個(gè)復(fù)孔。

　　3、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定 OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X 軸），OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時(shí)間。）

　　二、細(xì)胞活性檢測(cè)

　　1、在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100?L/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在 37℃,5% CO2 的條件下）。

　　2、向每孔加入 10?L CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù)）。

　　3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。

　　4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450nm 處的吸光度。

　　5、cck8檢測(cè)試劑盒如果暫時(shí)不測(cè)定 OD 值，打算以后測(cè)定的話(huà)，可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

　　三、細(xì)胞增值-毒性檢測(cè)

　　1、在 96 孔板中配置 100  µL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí)（在 37 ℃，5% CO2 的條件下）。

　　2、向培養(yǎng)板加入 10 µL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24 或 48 小時(shí)）。

　　3、向每孔加入 10  µLCCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù)）。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話(huà)，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。

　　4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。

　　5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 處的吸光度。

　　6、cck8檢測(cè)試劑盒如果暫時(shí)不測(cè)定 OD 值，打算以后測(cè)定的話(huà)，可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。